某免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告

来源：  发布日期：2011-02-23  发布者：晓天  共阅1196次

　　新城疫是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性和毁灭性的传染病。新城疫流行于世界各国，在150多个国家和地区都有此病发生。随着高度集约化养鸡业的发展，新城疫的防治也备受关注。近年来，新城疫的流行趋势发生了变化，以发病率低、临床症状不明显、病理变化不典型、死亡率低、蛋鸡产蛋量下降为特征的非典型新城疫，使得新城疫的防治变得更加复杂和棘手。新城疫目前仍然是严重危害我国养禽业的主要疾病之一，造成的经济损失十分巨大。除了大量死亡的直接损失外，还因幸存者生长发育受阻、饲料转化率低、产蛋量下降、受精率和孵化率降低以及封锁隔离等措施花费的大量人力和财力所造成的间接经济损失。

　　由于机体免疫机能状况等很多因素的综合影响，使新城疫疫苗接种效果不佳，甚至免疫失败，新城疫的发病次数仍然很高。再者，由于近十多年来养鸡业的蓬勃发展，使鸡场的数量巨增，星罗棋布，使疫病种类更加复杂化、病情程度更加严重。为了更加有效地防治鸡新城疫，疫苗免疫后鸡新城疫抗体效价监测，常作为免疫效果评价的重要依据。检测家禽血清中鸡新城疫抗体的方法有很多种，包括单向辐射免疫扩散试验、单向辐射溶血试验、琼脂扩散试验、鸡胚中和试验及蚀斑中和试验、酶联免疫吸附试验以及血凝抑制试验（HI）等，但常采用血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI）来定量测定鸡新城疫抗体。ELISA可以半自动化操作，其技术已经普及，并且ELISA与HI有很好的相关性。迄今为止，鸡红细胞血凝抑制试验仍不失为一种快速准确的试验手段。

　　本次监测采用HI方法，对市某户新城疫疫苗已免疫鸡群的1000只100日龄育成鸡进行检验，并结合农户的叙述及实地考察，做出该鸡群新城疫疫苗免疫效果评价，以便有的放矢地预防和控制该养鸡场的新城疫。

　　材料与方法

　　材料

　　抽检鸡 涿州市某蛋鸡场，从100日龄新城疫疫苗免疫育成鸡1000只中分别在100日龄和150日龄时随机抽取32只采血并分离血清。

　　试剂和药品 鸡新城疫HA抗原、新城疫阳性和阴性血清，由中监所生产；氯化钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠、柠檬酸三钠、葡萄糖、柠檬酸。

　　仪器微量震荡器 微量加样器、离心机、天平、手提式压力蒸汽消毒器、90oV型96孔血凝板、电冰箱。

　　（pH7.0~7.2）磷酸缓冲盐水：

　　氯化钠（GB1266-77）170克

　　磷酸二氢钾(GB1274-77)13.6克

　　氢氧化钠（GB-77）3.0克

　　蒸馏水1000毫升

　　高压灭菌，4℃保存，使用时作20倍稀释

　　阿氏（Aisevers）液配置。

　　葡萄糖2.05克

　　柠檬酸钠0.8克

　　柠檬酸0.055克

　　氯化钠0.42克

　　加蒸馏水至1000ml，加热溶解后调pH值至6.1，69kPa15min高压灭菌，4℃保存备用。

　　方法

　　鸡新城疫红细胞凝集（HA）试验参照文献，以微量法测试新城疫抗原HA价。

　　1%鸡红细胞悬液的制备：采取3只成年无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡血与等体积阿氏液混合，用1倍稀释液洗涤3次，每次均以1000r/分钟离心10分钟，洗涤后用1倍稀释液配成1%（V/V）红细胞悬液。4℃保存备用。

　　HA试验：自左向右于96孔V型血凝板的每1孔中加1倍稀释液25μL；吸取25μL的抗原滴加到第1孔，用微量加样器充分混匀后移取25μL，加于第2孔，依此法从左向右进行倍比稀释至第11孔，从第11孔吸取25μL弃取，第12孔不加抗原作阴性对照；每孔再加25μL稀释液；每孔均加1%红细胞悬液25μL，置微量震荡器震荡2分钟，室温下（20℃）作用30分钟，将血凝板倾斜观察结果。

　　结果判定：以100%凝集的最大稀释孔为新城疫抗原（HA）价，即一个凝集单位，不凝集者红细胞沉于孔底呈点状。第12孔为对照应不凝集。

　　鸡新城疫红细胞凝集抑制（HI）试验参照文献，以微量法测试待检血清中的新城疫血凝抑制抗体效价。

　　4个血凝单位抗原的配置：根据以确定的新城疫抗原血凝价，计算4个单位抗原的稀释倍数（血凝价/4），以一倍的稀释液配置出4单位抗原放入冷藏室待用。

　　待检血清的制备：采取32只待检鸡血液各5毫升置入试管中，静置至血液凝集后以3000r/分钟离心2分钟，吸取血清待检。

　　HI试验：于96孔V型血凝板上，自第1孔至第11孔各加稀释液25微升，11孔和12孔分别为抗原和红细胞对照；吸取25微升待检血清滴加到第1孔，用微量加样器充分混匀后移取25微升，加于第2孔，依此法从左向右进行倍比稀释至第10孔，吸取25微升弃去，12孔加稀释液50微升；除12孔外每孔中滴加25微升4单位抗原，室温下（20℃）作用30分钟；每孔均加1%红细胞悬液25微升；振荡2分钟，室温下（20℃）作用40分钟，待4单位抗原已凝集红细胞可观察结果。

　　结果判定：以100%抑制凝集的血清最大稀释度为该血清的滴度，即血凝抑制（HI）价。11孔的抗原对照应为100%凝集，12孔红细胞对照应为100%不凝集。

　　结果与分析

　　新城疫抗原的血凝（HA）价

　　由试验结果可知该新城疫抗原的凝集价为1∶512，4个凝集单位抗原稀释倍数为1∶128。

　　待检血清的新城疫抗体的血凝抑制（HI）价

　　由凝集试验可知，抗原对照均为100%凝集，红细胞对照均为100%不凝集，各待检血清的新城疫抗体血凝抑制价；4份为log2，14份为3log2，12份为5log2，4份为6log2，4份为7log2，4份为8log2。

　　就以上结果进一步分析该鸡群新城疫疫苗免疫鸡，HI价≥6log2者占37.5%、≤5log2者占62.5%，其中≤临界值4log2者占25%，表明该鸡群免疫失败，应考虑重新进行免疫。该鸡群HI价均≤8log2，而且临床健康，HI价分布离散，可判定未发生新城疫病毒感染。该户根据我们的建议用新城疫油乳剂灭活苗对鸡群进行了新城疫重新免疫，免疫50天后重新进行抗体监测结果均≥5log2，且≤8log2表明该鸡群新城疫免疫抗体合格对新城疫病毒有一定的抵抗力。

　　讨论

　　免疫效果评价

　　本次监测新城疫疫苗免疫鸡群，

　　HI价低于5log2者占62.5%，其中处于或者小于3log2者占25%，该鸡群存在被新城疫病毒感染的威胁，大于或等于6log2者占37.5%，表明该鸡群免疫失败，应考虑重新进行免疫。该鸡群的HI价均小于或等于8log2，且HI价分布离散，可判定未发生新城疫病毒感染。该户根据建议对鸡群进行了重新免疫后，经监测新城疫抗体合格。

　　免疫失败的因素

　　疫苗效价不高农户贪图便宜或方便就近从个体药店买些效价不高的疫苗用于鸡群免疫，致使免疫效果不佳。

　　免疫方法不当农户担心疫苗效力不够，选用3倍～4倍药量饮水，致使部分鸡能饮到超过正常剂量6倍～7倍的疫苗，这极易引起免疫麻痹或超过机体的免疫耐受力而使鸡发病；同时部分鸡只喝到很少一点疫苗，免疫力很差。

　　疫苗应用不合理养殖户认为灭活苗诱导产生的抗体水平较高，且维持时间长，因而首免就选用新城疫灭活苗进行肌肉注射，忽视了弱毒苗的免疫，造成免疫效果不佳。还有一些养殖户为了省事方便，该进行疫苗注射时不注射而采用饮水的方法进行免疫。前面我们进行监测的这1户就是在鸡群60日龄时没有用新城疫I系苗进行肌肉注射，而是用I系苗进行饮水免疫造成免疫不合格。

　　频繁免疫造成的免疫抑制近年来，农村养鸡户越来越认识到免疫的重要性，但有时在机体内抗体效价还很高且均匀度很好的情况下，盲目进行弱毒苗的免疫，容易造成抗体水平下降，鸡群容易在抗体下降时感染新城疫病毒。另一方面，由于抗原的频繁刺激，机体应答反应疲劳，形成免疫抑制。

　　免疫间隔时间长。由于雏鸡受母源抗体的影响和免疫器官发育不完善，首免后的抗体效价往往不高，下降较快，因此使用弱毒苗，在首免后3周之内应进行2免，时间间隔过长，容易造成免疫断当而染病。养鸡场因为鸡群状况不佳，总想把病治好了再去免疫接种，人为推迟免疫时间，结果因健康状况不佳，抵抗力下降。

　　鸡群免疫系统缺损影响鸡体的营养状况。农村养鸡的饲料多是自配料，随意性比较大，很容易造成某些营养物质，如某些必需氨基酸、维生素、微量元素的缺乏或不足，致使鸡体因营养不良而抑制免疫系统的功能。

　　各种应激因素的影响。如温度湿度的急剧变化、扩群、换料、饥渴等都能引起机体免疫系统功能的暂时性抑制，这时如果进行疫苗免疫接种很容易造成免疫失败。

　　免疫抑制性疾病的干扰。如传染性法氏囊病、传染性支气管病、马立克氏病等疾病都能降低免疫应答。

　　缺乏综合性防治措施。为降低养鸡成本，农村多采用大棚养殖，鸡舍简陋，保温、通风能力差，环境恶劣，致使鸡群抵抗力下降，一旦防疫和消毒措施不力，极易造成新城疫的发生和流行。尽管农户按照免疫程序及要求进行免疫，但忽视了对病鸡的隔离及消毒等防疫措施，病死鸡随便乱扔，甚至为了减少一点损失而将病鸡上市销售，造成疫病在更大范围内的传播流行。

　　防治措施隔离、消毒、严防病毒传入。紧急疫苗预防。用鸡新城疫多价油苗+IV系苗组，每只1毫升，进行紧急预防。

　　辅助预防。添加黄芪多糖和电解多维等提高鸡新城疫疫苗的免疫保护力。（完）

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